Technologie de production d'insuline

• Prévention

L'insuline est l'une des hormones produites par le corps humain lui-même, en particulier le pancréas. La violation de la sécrétion de cette substance entraîne l'apparition d'une maladie aussi grave que le diabète. Pour son traitement à l'aide d'une hormone synthétique, qui a longtemps été isolée du pancréas du bétail. Cependant, la technologie de production d'insuline à l'aide d'une bactérie très commune, Escherichia coli ou un champignon de levure, est utilisée depuis assez longtemps. L'utilisation de cette méthode vous permet d'éviter les réactions allergiques causées par une protéine étrangère, légèrement différente de celle de l'homme.

Schéma technologique

La technologie de production d’insuline comprend toutes les principales étapes de la production de produits biotechnologiques. Le résultat est un produit final cristallin, qui est ensuite utilisé pour préparer des solutions d'injection utilisées dans le traitement du diabète sucré de type I et II. L'effet principal de cette hormone dans l'organisme se manifeste par une diminution du taux de glucose dans le sang.

Les étapes de la production d'insuline seront les suivantes:

• Préliminaire Elle effectue des opérations telles que la préparation et la purification de l'eau et de l'air, le nettoyage des locaux industriels et la stérilisation du matériel, l'inspection du personnel, le traitement des mains et la délivrance de chaussures et de vêtements stériles. Également au stade préliminaire, la synthèse chimique primaire des chaînes moléculaires à partir desquelles la protéine est assemblée est réalisée. La chaîne A contient 21 résidus d’acides aminés et la chaîne B contient 30 acides aminés.
• Préparation de solutions nutritives et culture cellulaire. Pour que la cellule vivante produise le composé nécessaire, le gène correspondant est introduit. Pour cela, le plasmide est coupé par des enzymes spéciales, des restrictases, et les gènes codant pour la synthèse des composés nécessaires sont cousus dans celui-ci. Ensuite, en utilisant un procédé de microinjection, le plasmide modifié est renvoyé dans la cellule.
• Culture de la suspension cellulaire. Les cellules génétiquement modifiées sont placées dans une solution nutritive contenant tous les ingrédients nécessaires à la croissance, à la reproduction et à la stérilisation. La culture de la culture a lieu dans des bioréacteurs spéciaux, où l'air pré-purifié est alimenté. Périodiquement, une certaine quantité de solution nutritive est ajoutée au réacteur et, simultanément, le même volume de suspension cellulaire est soutiré.
• L'allocation de la culture. La séparation de la culture fluide et cellulaire est réalisée par sédimentation (sédimentation) dans des sédimentateurs spéciaux, puis par filtration, ce qui permet de préserver l’intégrité des cellules.
• Purification chromatographique de la substance. Elle est effectuée sur le matériel approprié, selon différentes méthodes, notamment la chromatographie frontale, par échange d’anions et par perméation de gel.
• Obtenir une molécule de protéine. Au stade de la biotechnologie, la synthèse d’une molécule d’insuline non produite a lieu. Et les deux composants de ses chaînes. Ils sont cousus après oxydation et pliage des chaînes obtenues, ce qui entraîne la formation de ponts disulfure.
• Lyophilisation dans un four spécial, après quoi la préparation cristalline obtenue est contrôlée pour vérifier sa conformité à la norme, emballée, étiquetée et expédiée au consommateur.

Notre société offre, à des conditions favorables, des lignes de production toutes faites où toutes les technologies de production d’insuline sont pleinement respectées. Grâce à des calculs précis, à un support technique et informatique, ainsi qu’à la formation du personnel dans le cadre d’un programme complet, la société sera rentable et ses produits seront en demande.

Types d'insuline et méthodes pour sa production

1. Types d'insuline

2. Obtenir de l'insuline

L'insuline (du latin Insula - island) est une hormone peptidique qui se forme dans les cellules bêta des îlots pancréatiques de Langerhans. Il a un effet multiforme sur le métabolisme dans presque tous les tissus.

La fonction principale de l'insuline est d'assurer la perméabilité des membranes cellulaires aux molécules de glucose. Sous une forme simplifiée, nous pouvons dire que non seulement les glucides, mais également tous les nutriments, sont finalement divisés en glucose, qui est utilisé pour synthétiser d'autres molécules contenant du carbone et constitue le seul type de combustible pour les centrales cellulaires - les mitochondries. Sans insuline, la perméabilité de la membrane cellulaire au glucose chute de 20 fois, les cellules meurent de faim et l'excès de sucre dissous dans le sang empoisonne le corps.

L'altération de la sécrétion d'insuline due à la destruction des cellules bêta - l'insuffisance absolue d'insuline - est un élément clé de la pathogenèse du diabète de type 1. La violation de l'effet de l'insuline sur les tissus - déficit relatif en insuline - a une place importante dans le développement du diabète de type 2.

L’histoire de la découverte de l’insuline est associée au nom du médecin russe I.M. Sobolev (seconde moitié du XIXe siècle), qui a prouvé que le taux de sucre dans le sang humain est régulé par une hormone spéciale du pancréas.

En 1922, une insuline isolée du pancréas d'un animal a été introduite pour la première fois chez un garçon diabétique de dix ans. le résultat a dépassé toutes les attentes et, un an plus tard, la société américaine Eli Lilly a lancé la première préparation d'insuline animale.

Après avoir reçu le premier lot industriel d’insuline dans les prochaines années, un énorme chemin d’isolement et de purification a été franchi. En conséquence, l'hormone est devenue disponible pour les patients atteints de diabète de type 1.

En 1935, le chercheur danois Hagedorn optimisa l'action de l'insuline dans le corps en proposant un traitement prolongé.

Les premiers cristaux d'insuline ont été obtenus en 1952 et en 1954, le biochimiste anglais G.Senger a déchiffré la structure de l'insuline. Le développement de méthodes de purification de l'hormone à partir d'autres substances hormonales et de produits de dégradation de l'insuline a permis d'obtenir une insuline homogène, appelée insuline à un composant.

Au début des années 70 gg. Les scientifiques soviétiques A. Yudaev et S. Shvachkin ont proposé la synthèse chimique de l'insuline. Cependant, la mise en œuvre de cette synthèse à l'échelle industrielle était coûteuse et non rentable.

À l'avenir, le degré de purification des insulines s'est progressivement amélioré, ce qui a permis de réduire les problèmes causés par les allergies à l'insuline, les troubles de la fonction rénale, les déficiences visuelles et la résistance à l'insuline immunitaire. L’hormone la plus efficace était nécessaire pour le traitement de substitution du diabète sucré: l’insuline homologue, c’est-à-dire l’insuline humaine.

Dans les années 80, les progrès de la biologie moléculaire ont permis de synthétiser les deux chaînes d'insuline humaine en utilisant E. coli, qui ont ensuite été combinées en une molécule d'hormone biologiquement active. L'insuline recombinante a été obtenue à l'Institut de chimie bioorganique de l'Académie des sciences de Russie en utilisant des souches génétiques d'E. Coli.

L’utilisation de la chromatographie d’affinité a considérablement réduit la teneur en protéines contaminantes de la préparation de poids moléculaire supérieur à celui de l’insuline. De telles protéines comprennent la proinsuline et les proinsulines partiellement clivées, capables d'induire la production d'anticorps anti-insuline.

L'utilisation d'insuline humaine dès le début du traitement minimise les réactions allergiques. L'insuline humaine est absorbée plus rapidement et, quelle que soit la forme du médicament, son action a une durée d'action plus courte que celle de l'insuline animale. Les insulines humaines sont moins immunogènes que le porc, en particulier les insulines mixtes bovines et porcines.

1. Types d'insuline

Les préparations d'insuline diffèrent par le degré de purification; source de réception (bovin, porcin, humain); substances ajoutées à la solution d'insuline (allongement de son action, bactériostatiques, etc.); la concentration; valeur du pH; la possibilité de mélanger ICD avec SDI.

Les préparations d'insuline varient selon la source. L'insuline porcine et bovine diffère de la composition en acides aminés de l'humain: bovin en trois acides aminés et porcin en un. Il n’est pas surprenant que, dans le traitement à l’insuline bovine, les effets indésirables se développent beaucoup plus fréquemment que lors du traitement à l’insuline porcine ou humaine. Ces réactions sont exprimées en résistance immunologique à l'insuline, allergie à l'insuline, lipodystrophie (modification de la graisse sous-cutanée au site d'injection).

Malgré les inconvénients évidents de l’insuline bovine, elle est encore largement utilisée dans le monde. Et pourtant, sur le plan immunologique, les lacunes de l'insuline bovine sont évidentes: il n'est en aucun cas recommandé de la prescrire aux patients présentant un diabète sucré nouvellement diagnostiqué, aux femmes enceintes ou à l'insulinothérapie à court terme, par exemple en période périopératoire. Les qualités négatives de l’insuline bovine étant également préservées lorsqu’elles sont utilisées en mélange avec du porc, les insulines mélangées (porcines + bovines) ne doivent pas non plus être utilisées pour le traitement de ces catégories de patients.

Les préparations d'insuline humaine pour la structure chimique sont complètement identiques à l'insuline humaine.

Le principal problème de la méthode de biosynthèse pour l'obtention d'insuline humaine est la purification complète du produit final à partir des plus petites impuretés des microorganismes utilisés et de leurs produits métaboliques. De nouvelles méthodes de contrôle de la qualité garantissent que les insulines biosynthétiques humaines des fabricants susmentionnés sont exemptes d’impuretés nocives; ainsi, leur degré de purification et leur efficacité de réduction du glucose répondent aux exigences les plus strictes et sont presque les mêmes. Tous les effets secondaires indésirables, en fonction des impuretés, ces médicaments ne contiennent pas d'insuline.

Actuellement, trois types d'insulines sont utilisés dans la pratique médicale:

- courte portée avec un effet rapide;

- durée moyenne d'action;

- longue action avec effet lent.

Tableau 1. Caractéristiques des préparations d'insuline du commerce

L'insuline à action rapide (ICD) - insuline régulière - est une insuline de zinc cristalline à action brève, soluble à pH neutre, dont l'effet se développe 15 minutes après l'administration sous-cutanée et dure entre 5 et 7 heures.

La première insuline prolongée (SDI) a été créée à la fin des années 30 afin que les patients puissent effectuer des injections moins fréquemment que lorsqu’ils utilisent un DCI seul, si possible une fois par jour. Afin d'augmenter la durée d'action, toutes les autres préparations d'insuline sont modifiées et, une fois dissoutes dans un milieu neutre, forment une suspension. Ils contiennent de la protamine dans un tampon phosphate - insuline protamine-zinc et NPH (protamine neutre Hagedorn) - de l'insuline NPH ou différentes concentrations de zinc dans un tampon acétate - insuline ultralente, bande, seize.

Les préparations d'insuline de durée moyenne contiennent de la protamine, qui est une protéine de moyenne m. 4400, riche en arginine et dérivé de la laitance de truite arc-en-ciel. Pour la formation du complexe nécessite un rapport de protamine et d'insuline 1:10. après administration sous-cutanée, les enzymes protéolytiques détruisent la protamine, permettant ainsi à l'insuline d'être absorbée.

L'insuline NPH ne modifie pas le profil pharmacocinétique de l'insuline réglementaire mélangée à celle-ci. L'insuline NPH est préférable à la bande d'insuline en tant que composant de la durée d'action moyenne dans les mélanges thérapeutiques contenant de l'insuline régulière.

Dans le tampon phosphate, toutes les insulines forment facilement des cristaux avec le zinc, mais seuls les cristaux d'insuline bovine sont suffisamment hydrophobes pour permettre une libération lente et régulière d'insuline caractéristique d'ultralente. Les cristaux de zinc d'insuline porcine se dissolvent plus rapidement, l'effet est plus précoce, la durée d'action est plus courte. Par conséquent, il n’existe aucun médicament ultralente contenant uniquement de l’insuline porcine. L’insuline porcine monocomposant est produite sous le nom d’insuline en suspension, insuline neutre, insuline isophane, insuline aminoquinuride.

La bande à insuline est un mélange d’insuline à 30% du semi-lent (précipité d’insuline amorphe avec des ions de zinc dans un tampon acétate, dont l’effet se dissipe assez rapidement) avec 70% d’insuline ultralente (insuline de zinc cristalline faiblement soluble, à action retardée et prolongée). Ces deux composants offrent une combinaison d'absorption relativement rapide et d'action stable à long terme, faisant de la bande d'insuline un agent thérapeutique commode.

2. Obtenir de l'insuline

L'insuline humaine peut être produite de quatre manières:

1) synthèse chimique complète;

2) extraction du pancréas d'une personne (ces deux méthodes ne conviennent pas à cause d'inefficacité: développement insuffisant de la première méthode et manque de matières premières pour une production en masse par la seconde méthode);

3) par un procédé semi-synthétique utilisant une substitution enzymatique-chimique en position 30 de la chaîne B de l'acide aminé alanine dans l'insuline de porc avec de la thréonine;

4) méthode de biosynthèse pour la technologie du génie génétique. Les deux dernières méthodes permettent d’obtenir de l’insuline humaine de haute pureté.

Actuellement, l'insuline humaine est principalement obtenue de deux manières: en modifiant l'insuline de porc par une méthode enzymatique synthétique et par une méthode de génie génétique.

L'insuline était la première protéine obtenue à des fins commerciales en utilisant la technologie de l'ADN recombinant. Il existe deux approches principales pour obtenir de l'insuline humaine génétiquement modifiée.

Dans le premier cas, des souches distinctes (différentes souches productrices) produisent les deux chaînes, suivies du repliement de la molécule (formation de ponts disulfure) et de la séparation des isoformes.

Dans le second cas, préparation sous forme de précurseur (proinsuline) suivie d'un clivage enzymatique avec la trypsine et la carboxypeptidase B en la forme active de l'hormone. Le plus préférable actuellement consiste à obtenir de l'insuline en tant que précurseur, en assurant la fermeture correcte des ponts disulfure (dans le cas de la production séparée de chaînes, des cycles successifs de dénaturation, de séparation des isoformes et de renaturation sont effectués).

Dans les deux approches, il est possible d'obtenir individuellement les composants de départ (chaînes A et B ou proinsuline) et en tant que partie de protéines hybrides. En plus des chaînes A et B ou de la proinsuline, la composition des protéines hybrides peut être présente:

- support de protéine, assurant le transport de la protéine hybride dans l'espace périplasmique de la cellule ou du milieu de culture;

- composant d'affinité, facilitant grandement la sélection d'une protéine hybride.

En même temps, ces deux composants peuvent être simultanément présents dans la composition de la protéine hybride. De plus, lors de la création de protéines hybrides, le principe de multidimensionnalité peut être utilisé (c'est-à-dire que plusieurs copies du polypeptide cible sont présentes dans la protéine hybride), ce qui permet d'augmenter considérablement le rendement du produit cible.

Au Royaume-Uni, les deux chaînes d'insuline humaine ont été synthétisées à l'aide de E. coli, qui ont ensuite été connectées à une molécule d'hormone biologiquement active. Pour qu'un organisme unicellulaire puisse synthétiser des molécules d'insuline sur ses ribosomes, il est nécessaire de lui fournir le programme nécessaire, c'est-à-dire de lui introduire le gène de l'hormone.

Obtenez chimiquement le précurseur de la biosynthèse de la programmation génique de l'insuline ou de deux gènes, en programmant séparément la biosynthèse des chaînes d'insuline A et B.

L'étape suivante est l'inclusion du gène du précurseur de l'insuline (ou des gènes de la chaîne séparément) dans le génome de E. coli, une souche spéciale d'E. Coli cultivée en laboratoire. Cette tâche est effectuée par génie génétique.

Le plasmide est isolé de E. coli par l'enzyme de restriction correspondante. Le gène synthétique est inséré dans un plasmide (clonage avec la partie C-terminale fonctionnellement active de la β-galactosidase E. coli). En conséquence, E. coli acquiert la capacité de synthétiser une chaîne protéique composée de galactosidase et d’insuline. Les polypeptides synthétisés sont chimiquement clivés de l'enzyme, puis purifiés. Dans les bactéries, environ 100 000 molécules d'insuline sont synthétisées par cellule bactérienne.

La nature de la substance hormonale produite par E. coli est déterminée par le gène inséré dans le génome de l'organisme unicellulaire. Si le gène précurseur de l'insuline est cloné, la bactérie synthétise le précurseur de l'insuline, qui est ensuite soumise à un traitement par enzyme de restriction pour éliminer la prépondérance avec l'isolement du peptide C, donnant ainsi une insuline biologiquement active.

Pour obtenir de l'insuline humaine purifiée, la protéine hybride isolée de la biomasse est soumise à une transformation enzymatique-chimique et à la purification chromatographique correspondante (échange primaire, anionique, à pénétration de gel).

L’insuline recombinante a été obtenue à l’Institute of RAS à l’aide de souches de E. coli modifiées par génie génétique. Un précurseur, une protéine hybride exprimée à raison de 40% de la protéine cellulaire totale, contenant de la préproinsuline est libéré de la biomasse cultivée. Sa transformation in insuline in vitro a lieu dans la même séquence qu'in vivo: le polypeptide principal est clivé, la préproinsuline est convertie en insuline par des étapes de sulfitolyse oxydante, suivie de la fermeture réductrice de trois liaisons disulfure et de l'isolement enzymatique de la liaison C-peptide. Après une série de purifications chromatographiques, comprenant échange d’ions, gel et HPLC, on obtient une insuline humaine de grande pureté et ayant une activité naturelle.

On peut utiliser une souche avec une séquence nucléotidique incluse dans un plasmide exprimant une protéine de fusion, qui consiste en une proinsuline linéaire et un fragment de protéine A de Staphylococcus aureus attachés à son extrémité N-terminale.

La culture de la biomasse saturée de cellules de la souche recombinante garantit le début de la production de la protéine hybride, dont l'isolement et la transformation séquentielle en tube conduisent à l'insuline.

Une autre voie est également possible: il se révèle dans un système d’expression bactérienne une protéine de fusion recombinante constituée de proinsuline humaine et d’une queue de polyhistidine qui y est fixée par un résidu méthionine. Il est isolé par chromatographie sur chélate sur des colonnes de Ni-agarose à partir de corps d'inclusion et digéré avec du bromure de cyanogène.

La protéine isolée est S-sulfonée. La cartographie et l'analyse spectrométrique de masse de la proinsuline obtenue, purifiée par chromatographie d'échange d'ions sur échangeur d'anions et HPLC (chromatographie en phase liquide à haute performance) RP (phase inverse), montrent la présence de ponts disulfure correspondant aux ponts disulfure de la proinsuline humaine native.

Récemment, une attention particulière a été accordée à la simplification de la procédure de production d'insuline recombinante par des méthodes de génie génétique. Par exemple, une protéine de fusion constituée du peptide leader de l'interleukine 2 lié à l'extrémité N-terminale de la proinsuline peut être obtenue via un résidu de lysine. La protéine est efficacement exprimée et localisée dans des corps d'inclusion. Après isolement, la protéine est clivée avec de la trypsine pour produire de l'insuline et du peptide C.

L'insuline et le peptide C résultants ont été purifiés par RP-HPLC. Lors de la création de structures de fusion, le rapport de masse de la protéine porteuse au polypeptide cible est très important. Les peptides C sont reliés par le principe de la queue à la queue en utilisant des espaceurs d'acides aminés portant le site de restriction Sfi I et deux résidus arginine au début et à la fin de l'espaceur pour le clivage ultérieur de la protéine avec la trypsine. Les produits de clivage HPLC montrent que le clivage du peptide C est quantitatif, ce qui permet d'utiliser la méthode des gènes de synthèse multimériques pour obtenir des polypeptides cibles à l'échelle industrielle.

Le diabète sucré est une maladie chronique causée par un déficit absolu ou relatif en insuline. Il se caractérise par un trouble métabolique profond des glucides avec hyperglycémie et glucosurie, ainsi que par d'autres troubles métaboliques résultant d'une exposition à un certain nombre de facteurs génétiques et externes.

À ce jour, l'insuline est un moyen radical et, dans la plupart des cas, le seul moyen de préserver la vie et le handicap des personnes atteintes de diabète. Avant de recevoir et d'introduire de l'insuline à la clinique en 1922-1923. Les patients atteints de diabète sucré de type I attendaient une issue fatale un à deux ans après le début de la maladie, malgré l’utilisation des régimes les plus débilitants. Les patients atteints de diabète sucré de type I ont besoin d'un traitement de remplacement à l'insuline à vie. L’arrêt du traitement pour diverses raisons liées à l’introduction régulière d’insuline entraîne l’apparition rapide de complications et la mort imminente du patient.

Actuellement, le diabète en termes de prévalence occupe la 3ème place après les maladies cardiovasculaires et oncologiques. Selon l'Organisation mondiale de la santé, la prévalence du diabète parmi la population adulte dans la plupart des régions du monde est de 2 à 5% et le nombre de patients a tendance à augmenter presque deux fois tous les 15 ans. Malgré les progrès évidents dans le domaine des soins de santé, le nombre de patients insulino-dépendants augmente chaque année et, pour le moment, rien qu'en Russie, le nombre de patients atteint 2 millions.

La création de médicaments à base d'insuline génétique humaine ouvre de nouvelles possibilités de résoudre de nombreux problèmes de diabétologie en Russie afin de sauver la vie de millions de diabétiques.

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Réglementation pour la production d'insuline génétiquement modifiée méthode

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Établissement d'enseignement public

enseignement professionnel supérieur

Université médicale d'État de Koursk

Agence fédérale pour la santé et le développement social

Département de technologie pharmaceutique

obtenir de l'insuline génétiquement modifiée à l'aide de la biotechnologie ADNr

Étudiant de 5ème année 5 groupes

Ph.D., enseignante principale Maravina I.N.

Section I. Caractéristiques du produit final 3

Section II. Caractéristiques des matières premières 5

Section III. Schéma de production chimique 6

Section IV. Schéma de production technologique 7

Section V. Organigramme de production et spécifications

Section VI. Déclaration de processus 10

Section VII. Méthodes d'analyse 14

Section VIII. Sécurité, sécurité incendie,

assainissement industriel 16

Section IX. Liste des instructions de production 17

Section I. Caractéristiques du produit final

Biomasse sèche d'insuline

Description Les solutions d'insuline sont un liquide acide clair, incolore ou légèrement jaunâtre (pH 2,0–3,5), préparé en diluant de l'insuline cristalline dans de l'eau acidifiée avec de l'acide chlorhydrique avec addition de glycérol et d'une solution à 0,25–0,30% de phénol ou de tricrésol pour la mise en conserve.

Agent hypoglycémique, insuline à action brève. Interagit avec un récepteur spécifique dans la membrane externe des cellules et forme un complexe insuline-récepteur. En activant la biosynthèse de l'AMPc dans les cellules adipeuses et hépatiques, ou en pénétrant directement dans les cellules musculaires, le complexe insuline-récepteur stimule les processus intracellulaires, notamment: synthèse d'un certain nombre d'enzymes clés (hexokinase, pyruvate kinase, glycogène synthétase, etc.). La diminution de la glycémie est due à une augmentation de son transport intracellulaire, à une absorption et une absorption accrues par les tissus, à une stimulation de la lipogenèse, à la glycogénogenèse, à la synthèse des protéines, à une diminution du taux de production de glucose par le foie, etc. La durée d'action des préparations d'insuline est principalement due à l'absorption facteurs (à partir d'une dose, d'une méthode et d'un site d'injection). Après p / au début de l'effet - après 0,5 h, l'effet maximum - après 1-3 heures, la durée d'action - 8 heures.

Diabète sucré de type 1 (insulino-dépendant). Diabète sucré de type 2 (non insulino-dépendant): stade de résistance aux hypoglycémiants oraux, résistance partielle à ces médicaments (traitement d'association), maladies intercurrentes, grossesse.

Au début du traitement - déficience visuelle, gonflement des membres. Avec l'introduction de doses trop importantes d'insuline ou une violation de l'alimentation (sauts de repas), ainsi que des exercices excessifs, une hypoglycémie (sueurs froides, peau pâle, nervosité, tremblements, anxiété, fatigue excessive, faiblesse, désorientation, vertiges, maux de tête, sensation de faim prononcée, déficience visuelle temporaire, nausée, tachycardie, dans les cas graves - perte de conscience, coma). Réactions allergiques systémiques: transpiration accrue, vomissements, difficultés respiratoires, palpitations, vertiges.

Durée de vie - 1 an à partir de la date de fabrication.

Section II. Caractéristiques des matières premières

Chaînes de gènes codant pour la synthèse des chaînes A et B

Synthétisé chimiquement

La culture doit être pure

Sacs en papier à quatre couches

Tissus par bande de coton

Section III. Schéma de production chimique

Les transformations chimiques dans la production d'insuline génétiquement modifiée sont absentes.

Section IV: Schéma technologique pour la production d'insuline

Préparation des locaux et des équipements

Production de traitement sanitaire

Préparation de vêtements technologiques

Synthèse des chaînes A et B

L'introduction de gènes dans le plasmide

Introduction de r-ADN dans la cellule permissive

Préparation des nutriments

Culture de culture en suspension

Obtenir une molécule d'insuline

Selon les indicateurs FS

Schéma de production instrumentale et spécification d'équipement

1 - Réacteur chimique

2 - L'introduction de gènes dans le plasmide

4 - Unité de stérilisation continue

5 - Bioréacteur industriel

6 - Sélection des chaînes

7 - Installation chromatographique

8 - obtenir une molécule d'insuline

9 - Lyophilisateur

10 - Table analytique

Section VI. Description du processus

BP 1. Préparation de l'eau

Les distillateurs à membrane sont conçus pour obtenir une eau dessalée répondant aux exigences de GOST 6709-97 "Eau distillée". Productivité des distillateurs - de 3 à 15 l / heure (installations de laboratoire dans un ensemble complet économique), ainsi que de 5 à 30 l / h (installations de laboratoire). Le processus de filtration comprend les étapes suivantes: pré-traitement sur charbon actif, filtration sur membrane et déionisation de l'eau à l'aide de résines échangeuses d'ions. Le pré-filtre élimine les particules en suspension, le chlore, les matières organiques de haut poids moléculaire et les ions de métaux lourds de l'eau du robinet. La filtration membranaire est basée sur le phénomène de l'osmose inverse, dans lequel l'eau, lorsqu'elle traverse une membrane semi-perméable, est purifiée à partir de sels y dissous, d'impuretés organiques de faible poids moléculaire, de bactéries et de micro-organismes. Le filtre avec les résines échangeuses d'ions permet une purification complète du filtrat des sels dissous.

BP 2. Traitement sanitaire de la production.

BP 2.1. Les exigences suivantes sont imposées dans les locaux pour la fabrication de formes posologiques stériles:

Doit être maintenue dans une propreté irréprochable, sujette à un nettoyage quotidien et général obligatoire ainsi qu’à des réparations périodiques;

Peut être exposé aux rayons UV pour la désinfection de l'air à l'aide d'irradiateurs fixes ou portables;

L'éclairage, la température, l'humidité et la ventilation ne doivent pas avoir d'incidence négative directe ou indirecte sur la qualité des produits finis.

Doit contenir le minimum nécessaire pour la conduite du processus de production, la quantité d’équipement et de mobilier;

L'accouplement entre les murs, le sol et le plafond doit avoir une forme arrondie.

Dans les locaux des classes de propreté I et II, il ne devrait pas y avoir de communications ouvertes, de conduits d'air;

Les locaux d'une classe supérieure de propreté doivent être situés dans une pièce d'une classe inférieure de propreté. L'accès du personnel et des matières premières à une salle blanche se fait uniquement par des entrées d'air qui sont alimentées en air stérile selon le schéma «descendant»;

Le transfert du produit fini doit être effectué à l'aide d'un convoyeur traversant les parois.

BP 2.2. Préparation de l'équipement

Exigences pour la préparation du matériel:

L'équipement doit être conçu et placé de telle sorte que son fonctionnement, son entretien et ses réparations puissent être effectués en dehors des lieux «propres»;

L'équipement utilisé pour travailler dans des conditions d'asepsie doit comporter des enregistreurs permettant de surveiller les paramètres du processus et la présence d'appareils d'alarme en cas de dysfonctionnement.

Le matériel doit être nettoyé, désinfecté et, si nécessaire, stérilisé;

L'équipement doit être surveillé pour la pureté microbiologique;

La surface de travail de l'équipement doit être lisse, en matériau non toxique et non corrosif.

BP 2.3. Formation du personnel

Besoins en personnel:

Le personnel doit avoir une connaissance minimale des règles d'hygiène, d'assainissement et des BPF;

Les employés atteints de maladies infectieuses, de plaies ouvertes sur la peau et de porteurs de la microflore pathogène ne sont pas autorisés à travailler;

Il est interdit de parler, de manger, de bouger rapidement sur le lieu de travail.

Observez strictement les règles d'hygiène personnelle, enlevez les produits cosmétiques du visage et enlevez les bijoux avant d'entrer dans la pièce "propre";

Prenez une douche, lavez-vous et nettoyez-vous les mains avec des désinfectants, enfilez un ensemble de chaussures et de vêtements technologiques stériles.

BP 3. Synthèse des chaînes A et B.

La synthèse des chaînes est réalisée par une méthode chimique. La chaîne A contient 21 résidus d’acides aminés, la chaîne B - 30 résidus

BP 4. L'introduction de gènes dans le plasmide.

Pour que le plasmide accepte un gène étranger, sa chaîne est coupée avec des enzymes de restriction. Pour lier les gènes codant pour la synthèse des chaînes A et B, des résidus d’oligosaccharides de différentes longueurs sont utilisés - agents de liaison et adaptateurs. Lorsque la molécule est fermée, vous pouvez la saisir dans une cellule permissive.

BP 5. L'introduction de r-ADN dans la cellule permissive.

L'introduction de p = ADN dans une cellule de E. coli est réalisée par microinjection: un plasmide contenant un ADN vecteur est injecté dans une cellule de E. coli avec une aiguille en verre ultra-fine spéciale.

TP 6. Préparation du milieu nutritif

Le milieu nutritif principal pour la culture de E. coli est le bouillon selon Miller. Ingrédients: hydrolysat de caséine, extrait de levure, chlorure de sodium, agar-agar. La valeur finale du pH (à 25 ° C) est de 7,0 ± 0,2 Le bouillon de Hottinger est également utilisé. Ingrédients: hydrolysat de Hottinger, chlorure de sodium, eau distillée.

La stérilisation du milieu nutritif est effectuée dans une machine à stérilisation continue - ONS. Le milieu nutritif traverse successivement la section de chauffage, la section de maintien et la section de refroidissement.

TP 7. Culture de la culture en suspension

La culture de bioculture est réalisée dans des bioréacteurs, culture en suspension dans laquelle est mélangé en raison de l'apport d'air dans le bioréacteur. Le processus est effectué en mode semi-périodique, lorsqu'une certaine quantité de milieu nutritif frais est constamment ajoutée au bioréacteur et que, simultanément, le même volume de suspension cellulaire est pris.

TP 8. Isolement de la culture tissulaire.

La séparation de la culture tissulaire du milieu nutritif s'effectue par la méthode de sédimentation (sédimentation) dans les sédimenteurs, une séparation plus profonde est obtenue en filtrant une méthode douce pour préserver l’intégrité des cellules en culture.

L'insuline est purifiée par chromatographie: frontale, perméation de gel, échange d'anions. La purification de l'insuline et de ses dérivés sur des sorbants ayant de fortes propriétés d'échange de cations (par exemple, SP-Sepharose FF) peut être utilisée avec des systèmes tampons à base d'acétate d'ammonium à faible teneur en urée (jusqu'à 2 M ou moins).

TP 10. Obtention de la molécule d'insuline

Les chaînes sélectionnées et purifiées sont pliées et oxydées, ce qui garantit la formation de ponts disulfure appropriés.

Le séchage du produit est effectué dans un lyophilisateur.

TP 12. Évaluation de la qualité du produit fini.

Apparence (comme décrit), activité (méthode biologique).

UMO 13. Emballage, étiquetage, expédition.

L'activité de l'insuline est mesurée en unités d'action (ED) ou en unités d'action internationales (IU - russe ou IU - anglais ou UI - français). 1 unité correspond à l'activité de 1/24 mg (41,66 µg) d'insuline cristalline.

En 1922, Frederick Banting suggéra de considérer l'unité d'action d'insuline comme le nombre de centimètres cubes d'extrait pancréatique qui entraînait l'hypoglycémie chez un lapin en bonne santé avec un niveau de SC de 2,5 mmol / L pendant 2-4 heures. Un peu plus tard dans la même année, la même équipe a proposé une unité «souris» - la quantité d’insuline nécessaire pour entraîner des convulsions chez la moitié du groupe de souris expérimental (les chercheurs ont tout d’abord agi par analogie avec la DL50).

L'année suivante, le Comité international de normalisation a adopté la définition de l'unité d'action de l'insuline: "La quantité d'insuline nécessaire pour abaisser le niveau de glucose dans le sang jusqu'au niveau auquel les crises commencent chez les lapins de 2 kg ne recevant pas de nourriture dans les 24 heures." Cette unité, en l'honneur du groupe torontois Banting and Best, a été nommée unité d'action de l'insuline de Toronto.

En 1925, la première norme internationale a été introduite, établissant qu’une unité d’action d’action de l’insuline équivaut à 1/8 mg d’insuline cristalline.

Compte tenu des progrès considérables réalisés en matière de purification de l'insuline et des inconvénients liés à l'utilisation d'une unité aussi importante en 1936, le Comité de la Société des Nations a approuvé une nouvelle norme internationale pour l'action de l'insuline, qui assimilait l'unité à 1/22 mg d'insuline cristalline. En 1952, le standard a été à nouveau changé et 1 unité a été assimilée à 1 / 24,5 mg d'insuline cristalline et en 1958, le quatrième standard est finalement apparu (1 U est égal à 1/24 mg d'insuline cristalline). En 1982, l’OMS a apporté les derniers ajustements à la norme, qui n’affectaient pas la définition de l’unité mais concernaient uniquement les modifications liées à l’émergence de l’insuline génétiquement modifiée.

Section VIII. Sécurité, sécurité incendie et

Chaque ouvrier et ouvrier du génie à la réception du travail doit suivre une instruction primaire. Le briefing principal est effectué par le contremaître ou le capitaine selon le programme suivant:

Les principales dispositions de la législation sur la protection du travail, la sécurité et l’assainissement industriel;

Le but et la procédure d'utilisation de vêtements spéciaux et d'équipements de protection individuelle;

Tâches en milieu de travail;

Exigences relatives à la bonne organisation et à la maintenance du lieu de travail;

Règles générales de sécurité électrique, valeur de la ventilation et règles d'utilisation des systèmes de ventilation;

Connaissance du processus technologique, de l'équipement de l'appareil et de tous les objets dangereux.

Tous les équipements électriques doivent être conformes aux exigences des "Règles de fonctionnement des équipements électriques". L'équipement électrique doit être mis à la terre. Toutes les salles de production et de service, les installations et les installations devraient être pourvues d'un équipement d'extinction d'incendie et d'un équipement de lutte contre l'incendie.

L'admission de personnes non autorisées dans la boutique est interdite.

Section IX. Liste des instructions de production

Instructions de travail pour le traitement sanitaire des locaux.

Instructions pour la sécurité, l'assainissement industriel et la sécurité incendie.

Instructions pour la préparation, la livraison et la réception de la réparation de l'équipement.

Instructions sur la manière de recevoir les matières premières et les matières auxiliaires;

Plan d'élimination des accidents.

Instructions pour la régénération de la solution.

Instructions de travail pour l'opérateur de lavage, séchage et stérilisation des bouteilles.

Instructions pour les mécaniciens sur la réparation et la maintenance des pipelines.

Technologie de production d'insuline

Insulin.docx

Chapitre 1. Revue littéraire

1.3. Seringues, stylos et distributeurs d'insuline

1.4 Technique d'injection d'insuline ……………………………………...

1.5.Facteurs influant sur l'absorption et l'action de l'insuline.........

1.6. Complications de l'insulinothérapie ……………………………………..

1.7. Emballage d'insuline

1.8. Stockage d'insuline.

1.9. Moyens modernes d’améliorer l’insulinothérapie…..

Chapitre 2. Partie expérimentale

L'insuline (du latin Insula - l'île) - une hormone peptidique, est formée dans les cellules bêta des îlots de Langerhans du pancréas. Il a un effet multiforme sur le métabolisme dans presque tous les tissus.

La fonction principale de l'insuline est d'assurer la perméabilité des membranes cellulaires aux molécules de glucose. Sous une forme simplifiée, nous pouvons dire que non seulement les glucides, mais également tous les nutriments, sont finalement divisés en glucose, qui est utilisé pour synthétiser d'autres molécules contenant du carbone et constitue le seul type de combustible pour les centrales cellulaires - les mitochondries. Sans insuline, la perméabilité de la membrane cellulaire au glucose chute de 20 fois, les cellules meurent de faim et l'excès de sucre dissous dans le sang empoisonne le corps.

L'altération de la sécrétion d'insuline due à la destruction des cellules bêta - l'insuffisance absolue d'insuline - est un élément clé de la pathogenèse du diabète de type 1. La violation de l'effet de l'insuline sur les tissus - déficit relatif en insuline - a une place importante dans le développement du diabète de type 2.

Le nombre de personnes atteintes de diabète dans le monde est de 120 millions (2,5% de la population). Tous les 10-15 ans, le nombre de patients double. Selon l'Institut international du diabète (Australie), il y aura 220 millions de patients dans le monde d'ici 2010. En Ukraine, il y a environ 1 million de patients, dont 10-15% souffrent du diabète insulino-dépendant le plus grave (type I). En fait, le nombre de patients est deux à trois fois plus élevé en raison de formes cachées non diagnostiquées.

L’histoire de la découverte de l’insuline est associée au nom du médecin russe I.M. Sobolev (seconde moitié du XIXe siècle), qui a prouvé que le taux de sucre dans le sang humain est régulé par une hormone spéciale du pancréas.

En 1922, une insuline isolée du pancréas d'un animal a été introduite pour la première fois chez un garçon diabétique de dix ans. le résultat a dépassé toutes les attentes et, un an plus tard, la société américaine Eli Lilly a lancé la première préparation d'insuline animale.

Après avoir reçu le premier lot industriel d’insuline dans les prochaines années, un énorme chemin d’isolement et de purification a été franchi. En conséquence, l'hormone est devenue disponible pour les patients atteints de diabète de type 1.

En 1935, le chercheur danois Hagedorn optimisa l'action de l'insuline dans le corps en proposant un traitement prolongé.

Les premiers cristaux d'insuline ont été obtenus en 1952 et en 1954, le biochimiste anglais G.Senger a déchiffré la structure de l'insuline. Le développement de méthodes de purification de l'hormone à partir d'autres substances hormonales et de produits de dégradation de l'insuline a permis d'obtenir une insuline homogène, appelée insuline à un composant.

Au début des années 70 gg. Les scientifiques soviétiques A. Yudaev et S. Shvachkin ont proposé la synthèse chimique de l'insuline. Cependant, la mise en œuvre de cette synthèse à l'échelle industrielle était coûteuse et non rentable.

À l'avenir, le degré de purification des insulines s'est progressivement amélioré, ce qui a permis de réduire les problèmes causés par les allergies à l'insuline, les troubles de la fonction rénale, les déficiences visuelles et la résistance à l'insuline immunitaire. L’hormone la plus efficace était nécessaire pour le traitement de substitution du diabète sucré: l’insuline homologue, c’est-à-dire l’insuline humaine.

Dans les années 80, les progrès de la biologie moléculaire ont permis de synthétiser les deux chaînes d'insuline humaine en utilisant E. coli, qui ont ensuite été combinées en une molécule d'hormone biologiquement active. L'insuline recombinante a été obtenue à l'Institut de chimie bioorganique de l'Académie des sciences de Russie en utilisant des souches génétiques d'E. Coli.

L'objet de mon travail: L'étude des préparations d'insuline présentées sur notre marché, leurs avantages et inconvénients.

Tâches: Examen du processus d'obtention de l'insuline dans la production industrielle.

Chapitre 1. Revue littéraire

1.1 Obtenir de l'insuline

L'insuline humaine peut être produite de quatre manières:

1) synthèse chimique complète;

2) extraction du pancréas d'une personne (ces deux méthodes ne conviennent pas à cause d'inefficacité: développement insuffisant de la première méthode et manque de matières premières pour une production en masse par la seconde méthode);

3) par un procédé semi-synthétique utilisant une substitution enzymatique-chimique en position 30 de la chaîne B de l'acide aminé alanine dans l'insuline de porc avec de la thréonine;

4) méthode de biosynthèse pour la technologie du génie génétique. Les deux dernières méthodes permettent d’obtenir de l’insuline humaine de haute pureté.

Envisagez d’obtenir de l’insuline par biosynthèse en termes d’avantages de cette méthode.

Donc, les avantages d'obtenir l'insuline biosynthétiquement.

Avant l'introduction de la méthode de production d'insuline utilisant des microorganismes recombinants dans l'industrie, il n'existait qu'un moyen d'obtenir de l'insuline - à partir des glandes pancréatiques de bovins et de porcs. L'insuline dérivée du pancréas de bovin diffère de l'insuline humaine par 3 résidus d'acide aminé, et l'insuline obtenue de la glande de porc ne représente qu'un résidu d'acide aminé, c'est-à-dire qu'il est plus proche de l'insuline humaine. Cependant, avec l'introduction de protéines dont la structure diffère de celles des protéines humaines, même dans une expression aussi mineure, des réactions allergiques peuvent survenir. Une telle insuline en tant que protéine étrangère peut également être inactivée dans le sang par les anticorps résultants.

En outre, pour obtenir 1 kilogramme d’insuline, il faut 35 000 porcs (s’il est connu que le besoin annuel en insuline est de 1 tonne de médicament). D'autre part, la même quantité d'insuline peut être obtenue de manière biosynthétique par biosynthèse dans un fermenteur de 25 cubes à l'aide du microorganisme recombinant Escherichia coli.

La méthode biosynthétique d'obtention de l'insuline a été appliquée au début des années 80.

Arrêtons-nous sur le schéma de production d'insuline recombinante (Eli Lilli- Eli-Lilly, États-Unis d'Amérique):

Étape 1. Par synthèse chimique, des séquences nucléotidiques ont été créées pour coder la formation des chaînes A et B, c’est-à-dire que des gènes synthétiques ont été créés.

2. étape. Chacun des gènes synthétiques est introduit dans un plasmide (un gène synthétisant le brin A est introduit dans un plasmide et un gène synthétisant le brin B est introduit dans l'autre plasmide).

3. étape. Entrez le gène codant pour la formation de l'enzyme bétagalactosidase. Ce gène est inclus dans chaque plasmide afin d'obtenir une réplication vigoureuse des plasmides.

4. étape. Les plasmides sont introduits dans une cellule d'Escherichia coli - Escherichia coli et deux cultures productrices sont obtenues, une culture synthétisant la chaîne A, la seconde chaîne B.

5. étape. Placez deux cultures dans un fermenteur. Mercredi, ajoutez du galactose, qui induit la formation de l'enzyme bétagalactosidase. Dans ce cas, les plasmides se répliquent activement, formant de nombreuses copies de plasmides et, par conséquent, de nombreux gènes synthétisant les chaînes A et B.

6. étape. Les cellules se lysent, sécrètent les chaînes A et B, associées à la bétagalactosidase. Tout cela est traité avec du bromure de cyanogène et les chaînes A et B sont clivées de la bêta-galactosidase. Faites ensuite une purification et une sélection plus poussées des chaînes A et B.

7. étape. Les résidus de cystéine sont oxydés, liés et préparés avec de l'insuline.

L'insuline obtenue par cette voie est une structure d'insuline humaine qui, dès le début du traitement, minimise la survenue de réactions allergiques.

Pour obtenir de l'insuline humaine purifiée, la protéine hybride isolée de la biomasse est soumise à une transformation enzymatique-chimique et à une purification chromatographique appropriée (frontale, à pénétration de gel, à échange d'anions).

Une insuline recombinante a été obtenue à l’Institut de l’Académie des sciences de Russie à l’aide de souches d'E. Coli modifiées génétiquement: la méthode consiste à synthétiser son précurseur biologique de proinsuline, ce qui permet de ne pas effectuer la synthèse séparée des chaînes d'insuline A et B. Pour la production de la partie pro-insuline de la molécule dans E. coli. le plasmide est introduit (il est obtenu en insérant de l'ADN naturel ou étranger - c'est comment une molécule d'ARN recombinant est obtenue). Le plasmide assure la synthèse de la protéine recombinante, qui est une séquence leader et un fragment de la protéine, ainsi que de la proinsuline humaine avec un résidu méthionine (acide aminé) entre elles. La partie pro-insuline de la molécule est séparée par traitement au brome cyan dans l'acide acétique (le clivage est effectué sélectivement - par le résidu méthionine). Le mélange (partie de proinsuline et séquence leader) est séparé par chromatographie. À l'étape suivante, dans la séquence résultante de proinsuline, l'arrangement mutuel correct des chaînes A et B est effectué, qui est effectué par le peptide partiel C. Dans l'étape suivante, le peptide de liaison C est isolé par une méthode enzymatique. Après une série de purifications chromatographiques, notamment par échange d'ions, gel et HPLC, j'obtiens une insuline humaine de haute pureté et une activité naturelle.

Le contrôle de la qualité de l'insuline génétiquement modifiée implique le contrôle d'indicateurs supplémentaires caractérisant la stabilité de la souche recombinante et du plasmide, l'absence de matériel génétique étranger dans la préparation, l'identité du gène exprimé, etc.

1.2 Préparations d'insuline

Les préparations d'insuline varient selon la source. L'insuline porcine et bovine diffère de la composition en acides aminés de l'humain: bovin en trois acides aminés et porcin en un. Il n’est pas surprenant que, dans le traitement à l’insuline bovine, les effets indésirables se développent beaucoup plus fréquemment que lors du traitement à l’insuline porcine ou humaine. Ces réactions sont exprimées en résistance immunologique à l'insuline, allergie à l'insuline, lipodystrophie (modification de la graisse sous-cutanée au site d'injection).

Malgré les inconvénients évidents de l’insuline bovine, elle est encore largement utilisée dans le monde. Et pourtant, sur le plan immunologique, les lacunes de l'insuline bovine sont évidentes: il n'est en aucun cas recommandé de la prescrire aux patients présentant un diabète sucré nouvellement diagnostiqué, aux femmes enceintes ou à l'insulinothérapie à court terme, par exemple en période périopératoire. Les qualités négatives de l’insuline bovine étant également préservées lorsqu’elles sont utilisées en mélange avec du porc, les insulines mélangées (porcines + bovines) ne doivent pas non plus être utilisées pour le traitement de ces catégories de patients.

Les préparations d'insuline humaine pour la structure chimique sont complètement identiques à l'insuline humaine.

Le principal problème de la méthode de biosynthèse pour l'obtention d'insuline humaine est la purification complète du produit final à partir des plus petites impuretés des microorganismes utilisés et de leurs produits métaboliques. De nouvelles méthodes de contrôle de la qualité garantissent que les insulines biosynthétiques humaines des fabricants susmentionnés sont exemptes d’impuretés nocives; ainsi, leur degré de purification et leur efficacité de réduction du glucose répondent aux exigences les plus strictes et sont presque les mêmes. Tous les effets secondaires indésirables, en fonction des impuretés, ces médicaments ne contiennent pas d'insuline.

Les préparations d'insuline, en fonction du début et de la durée d'action, sont réparties dans les groupes suivants:
1) les insulines à action rapide et ultracourte;
2) insulines à action brève (insulines «simples»);
3) insulines de durée moyenne (insulines dites «intermédiaires»);
4) insulines à action prolongée;
5) «insulines mixtes» - une combinaison d’insulines de différentes durées d’action.

Le nombre de préparations d'insuline portant des noms différents est de plusieurs dizaines et de nouvelles dénominations d'insuline de divers fabricants étrangers et, ces dernières années, de sociétés pharmaceutiques nationales sont ajoutées chaque année.

Insulines rapides et ultracourtes

Les insulines rapides et ultracourtes incluent actuellement trois nouveaux médicaments: lispro (humalog), aspart (novoïde, novolog) et glulissin (apidra). Leur particularité réside dans le début et la fin plus rapides de l'action par rapport à l'insuline habituelle, «simple». L’apparition rapide de l’effet hypoglycémiant des nouvelles insulines est due à leur absorption accélérée par la graisse sous-cutanée. Les particularités des nouvelles insulines permettent de réduire le délai entre leurs injections et leur prise alimentaire, de réduire le taux de glycémie post-nutritionnelle et de réduire l'incidence d'hypoglycémie.

Le début d'action de lizpro, d'aspart et de glulisine est compris entre 5 et 10-15 minutes, l'effet maximal (action maximale) - après 60 minutes, la durée d'action - 3 - 5 heures. Ces insulines sont administrées 5 à 15 minutes avant un repas ou immédiatement avant. Il a été établi que l'administration d'insuline lispro immédiatement après un repas permet également un bon contrôle de la glycémie. Cependant, il est important de se rappeler que l'administration de ces insulines 20 à 30 minutes avant un repas peut entraîner une hypoglycémie.

Les patients qui passent à l’introduction de ces insulines doivent contrôler plus souvent leur glycémie jusqu’à ce qu’ils apprennent à établir une corrélation entre la quantité de glucides consommée et la dose d’insuline. Ainsi, les doses de médicaments sont définies individuellement.

Si vous n'utilisez que de l'humalog (insuline lispro), un nouveau rapide ou un novice (insuline asparte) ou un apidra (insuline glulisine), vous pouvez les administrer 4 à 6 fois par jour, en association avec des insulines à action prolongée 3 fois par jour. Un excès de dose unique de 40 U est autorisé dans des cas exceptionnels. Ces insulines, disponibles en flacons, peuvent être mélangées dans la même seringue avec des préparations d’insuline humaine ayant une durée d’action plus longue. Lorsque cette insuline à grande vitesse est collectée dans la seringue en premier. L'injection est souhaitable de faire immédiatement après le mélange. Ces insulines produites en cartouches (manchons spéciaux) ne sont pas destinées à la préparation de mélanges avec une autre insuline.

C'est important!
Les nouvelles insulines à haute vitesse conviennent aux patients ayant un mode de vie actif. Leur utilisation est recommandée pour les infections aiguës, le stress émotionnel, l'augmentation de la quantité de glucides dans les aliments, la prise de médicaments qui favorisent l'hyperglycémie (hormones thyroïdiennes, corticostéroïdes - prednisolone, etc.), ainsi que d'autres intolérances. les préparations d'insuline ou l'hyperglycémie post-nutritionnelle, qui se prête mal à l'action des autres insulines. Il convient de souligner encore une fois que les insulines à action rapide doivent être utilisées en lien direct avec la prise de nourriture.